油菜是我国第一大油料作物,其稳定生产在国家粮油安全战略中具有重要作用。当前我国油菜生产方式正由传统的劳动密集型向规模化、机械化生产转变,化学除草已成为油菜轻简栽培的重要环节。与此同时,随着我国经济快速发展,农村劳动力成本大幅提高,油菜因比较效益低而伴生的生产管理粗放,导致草害日益严重,杂草防控难题成为制约我国油菜生产的重要因素之一。化学除草是控制农田杂草经济有效手段。然而,由于抗除草剂油菜品种的缺乏,造成我国油菜生产化除面积非常有限。因此,创制对特定除草剂具有高度抗性的油菜新种源,选育抗性品种实现化除对推动我国油菜生产发展刻不容缓。
近日,江苏省农业科学院油菜团队在The Crop Journal在线发表了题为“Development and molecular analysis of a novel acetohydroxyacid synthase rapeseed mutant with high resistance to sulfonylurea herbicides”的研究论文。课题组对前期获得的乙酰羟基酸合酶(AHAS)突变的磺酰脲类除草剂抗性油菜种质M342后代进行再次EMS诱变,创制获得了一个AHAS双基因位点突变的新种源DS3,其抗性效应为除草剂推荐使用浓度的16倍(图A,D)。参考拟南芥氨基酸序列,分析发现其中一个突变位点是与M342相同的AHAS3上Trp574Leu氨基酸取代,另一个新突变位点为AHAS1上Pro197Leu氨基酸取代。分离获得含AHAS1上Pro197Leu突变的材料M196,抗性效应是除草剂推荐使用浓度的2倍,并在拟南芥中进行了抗性转基因功能验证(图1C)。随后开发出检测新突变位点的KASP分子标记,在F2代群体中可有效进行抗除草剂基因型鉴定(图1B)。双突变位点间表现出较强的协同作用,导致了DS3的高抗除草剂表型(图1A,E)。对野生型和单突的AHAS1和AHAS3蛋白进行三维结构解析,发现这两个蛋白的3D构象改变(图1F-G)可能是引起油菜除草剂毒性响应、AHAS酶活性和基因表达等除草剂抗性变化的原因。
图1高抗磺酰脲类除草剂油菜新种质DS3的抗性和遗传分析